ニワトリの後肢のアポトーシスの観察

１　目的

２　準備

３　方法

	(1)	有精卵を、ふ卵器で３７℃、８日間培養する。ふ卵器内に水の入ったビーカーを置くなどして乾燥しないようにする。
	(2)	アルミはくを３０ｃｍ四方に切り、実験机の上に敷く。別のアルミはくを、よってドーナツ状にして、リングの中にふ卵８日目の卵を鈍端が上になるように置く。
	(3)	ピンセットを用いて、殻をていねいに、つつきながら割り、鈍端に直径３ｃｍ程度の穴を開ける。
	(4)	ピンセットで胚を、殻に開けた穴からゆっくりと引き出す。
	(5)	取り出した胚を、0.8％の生理食塩水の入ったペトリ皿上で、軽く洗って胚に付着している卵黄や卵白など取る。
	(6)	実体顕微鏡を用いて胚を観察し、胚膜（羊膜など）をピンセットでつまみ、ていねいに胚からはがす。
	(7)	使用直前に、１％ナイルブルー溶液を生理食塩水で100倍に希釈し、試薬瓶に入れる。
	(8)	試薬瓶に胚を入れ、ふたをして３７℃のふ卵器の中に２０分間置く。１０分程度経過したところで瓶を振って、溶液を撹拌させる。

４　観察

	(1)	胚を新しい生理食塩水の入ったペトリ皿に移し、実体顕微鏡で観察する。
	(2)	後肢が観察しづらい場合は、ピンセットで後肢の根元をつまんでハサミで切り離し、後肢を観察してもよい
		参考：	ナイルブルー溶液で細胞は青く染色される。死んだ細胞は、マクロファージにより食作用をうけ、マクロファージ内に青色の色素が蓄積することで、青い顆粒として観察される。

５　考察

６　実験上の留意点