１ ＤＮＡの抽出（動物の組織の場合）
| 練り製品や動物の組織の場合は，乳鉢に，抽出バッファー（100mmol/L NaCl，１％ＳＤＳを含む100mmol/L Tris-HCl（pH9.0））５mL，石英砂（少量）を入れてすり潰す。固形状の場合は，抽出バッファーをもう５mL程度追加する。ペースト状になったら，30分間室温で放置する。 |
２ ＤＮＡの抽出（生肉の場合）
| 生肉や動物の組織の場合は，その他のバッファーを用いて，すり潰した後，約20mLビーカー（200mL）に入れ，ブンゼンバーナーの弱火で30分間煮沸する。水分が蒸発するので焦がさないように時々水（20mL程度まで）を加える。コトコトと弱火で煮る感じで，ＰＣＲ用のテンプレートをとることができる。 |
３ ＤＮＡの抽出（キットを用いる場合）
| 高価ではあるが，非常に簡単にＰＣＲ用テンプレートＤＮＡを得ることができる。 頬粘膜細胞を採取して，ＤＮＡを抽出する例を以下に示す。 |
| (1) | 口の中を，水でゆすぎ，洗う。 | |
| (2) | 専用のブラシで，両頬の内側をそれぞれ20回ほどこする。 | |
| (3) | （２）のブラシを，専用のＤＮＡ抽出液内で最低５回以上撹拌する。 | |
| (4) | （３）の液をを，65℃で10分間湯浴し，撹拌した後，さらに，98℃で１分湯浴する。再度撹拌した後，98℃で２分湯浴し，最後に再び撹拌する。 |
４ ＤＮＡの精製
| 抽出を行った後の操作は，多くの場合，同じ操作で精製することができる。 |
| (1) | 駒込ピペットを用いてチューブ３本に抽出物のペーストまたは上清を各500μL入れる。以後，チューブのフタには，必ずマジックでサンプル番号を入れる。 | |
| (2) | 13,000回転で３分間遠心分離を行う。 | |
| (3) | 各々の上清の中層（一番澄んだ部分から）を700μL（チューブに半分くらい）を回収する。 | |
| (4) | phenol/chloroform/isoamyl-alcohol(25:24:1)を500μL加え，３分間混和する。フェノールは，変性作用が強く，健康を害するので，ビニール手袋をして作業する。皮膚に付着したら，速やかに石けんでよく洗う。 | |
| ※ フェノールは，昔は病院の消毒薬としても使われたが，人体に対する毒性から使われななった。皮膚につくと壊死を起こすので注意する。 | ||
| (5) | 13,000回転で３分間遠心分離を行う。 | |
| (6) | 側面からよく観察する。液を混合しないように丁寧にフタを開け，新しいチューブに上層の液をできるだけたくさん回収する。この段階でまだ，水の層にフェノールが残留腐蝕性があるので注意する。 | |
| (7) | chloroformを500μL加え，３分間混和する。クロロホルムは，細胞膜透過性が強く，健康を害するので，ビニール手袋をして作業し，吸い込まないように注意する。もし皮膚に付着したら，速やかに石けんでよく洗う。 | |
| ※ クロロホルムは有毒で，肝障害や呼吸器系の副作用があるために，もう30年以上も前から麻酔薬として使われていない。 | ||
| (8) | 13,000回転で３分間遠心分離を行う。 | |
| (9) | 側面からよく観察する。液を混合しないように丁寧にフタを開け，新しいチューブに上層の液をできるだけたくさん回収する。回収した液体が徐々に澄んできたことを確認する。 | |
| (10) | phenol/chloroform/isoamyl-alcohol(25:24:1)を500μL加え，３分間混和する。フェノールは，変性作用が強く，健康を害するので，ビニール手袋をして作業する。皮膚に付着したら，速やかに石けんでよく洗う。 | |
| (11) | 13,000回転で３分間遠心分離を行う。 | |
| (12) | 側面からよく観察する。液を混合しないように丁寧にフタを開け，新しいチューブに上層の液をできるだけたくさん回収する。この段階でまだ，水の層にフェノールが残留腐蝕性があるので注意する。 | |
| (13) | chloroformを500μL加え，３分間混和する。クロロホルムは，細胞膜透過性が強く，健康を害するので，ビニール手袋をして作業し，吸い込まないように注意する。もし皮膚に付着したら，速やかに石けんでよく洗う。 | |
| (14) | 13,000回転で３分間遠心分離を行う。 | |
| (15) | 側面からよく観察する。液を混合しないように丁寧にフタを開け，新しいチューブに上層の液をできるだけたくさん回収する。回収した液体が徐々に澄んできたことを確認する。 | |
| (16) | チューブごと冷えたエタノール（-20℃,800μL）に，（１５）の回収した層（約400μL）をゆっくり加える。側面から観察するとよい。加えすぎるとせっかく沈殿したエタノールが加えた水に溶解し出すので注意する。 | |
| (17) | １分間よく混和する。 | |
| (18) | 13,000回転で３分間遠心分離を行う。 | |
| (19) | チューブ先端部の側面に見える白色の沈殿物を確認する。 | |
| (20) | 白色の沈殿物を捨てないように，エタノールを捨てる。 | |
| (21) | キムワイプでエタノールの滴を取り，10分間風乾する。 | |
| (22) | TE100ｍLを加えて，易しく指でタッピングして，溶解，混和する。 | |
| ※このTEに溶解したＤＮＡが鋳型ＤＮＡ（template ＤＮＡ）となる。 | ||
| ※風乾させた乾燥ＤＮＡは，何年も保存ができる。また，液で保存するときはTEに溶解する。TEのTはTris緩衝液（バッフー）の略である。EはEDTAの略で，陽イオンのキレート剤（ＤＮＡ分解酵素の活性化）である。もちろんTEは清潔に作られ，滅菌したものを使わねばならない。 |
５ 参考文献
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A quick and simple method for the identification of meat species and meat products by PCR assay T.Matsunaga 他 Meat Science 51(1999)pp143-148 |